МУК 4.1.1397-03  

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств антидота мефенпир-диэтила в воде, почве,
зерне и соломе зерновых колосовых культур, зеленой массе и зерне кукурузы газохроматографическим методом

     
     
Дата введения 2003-06-30

     
     
     УТВЕРЖДЕНЫ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г.Онищенко 24 июня 2003 г.
     
     

1. Вводная часть

     
     Фирма производитель: Байер Кроп Сайенс (Германия).
     
     Действующее вещество: мефенпир-диэтил.
     
     Диэтил (RS)-1-(2,4-дихлорфенил)-5-метил-2-пиразолин-3,5-дикарбоксилат (ИЮПАК).
     
     Диэтил 1-(2,4-дихлорфенил)-4,5-дигидро-5-метил-1Н-пиразол-3,5-дикарбоксилат (С.А).
     
     Структурная формула:
     
     

     Белое кристаллическое вещество со слабым неспецифическим запахом.
     
     Температура плавления: 50-52 °С.
     
     Плотность при 20 °С: 1,31 кг/дм.
     
     Давление паров при 20 °С: 6,3х10 мПа
     
     Коэффициент распределения н-октанол/вода: =3,83
     
     Растворимость (в г/л растворителя) при 20 °С: ацетон >500, толуол >400, этилацетат >400, метанол >400; растворимость в воде - 20 мг/л.
     
     Вещество гидролизуется в кислотах и щелочах.
     
     Разрушается при облучении водного раствора солнечным светом: ДТ=2,9 дня.
     
     В почве в аэробных условиях быстро разрушается: ДТ<10 дней.
     
     Краткая токсикологическая характеристика
     
     Острая пероральная токсичность (LD) для крыс >5000 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD) для крыс >4000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LC) для крыс >1320 мг/м воздуха. Мефенпир-диэтил не оказывает раздражающего действия на кожу и слизистую оболочку глаз кролика, не обладает мутагенным и тератогенным эффектами. Для птиц, пчел, рыб, дождевых червей и водорослей малотоксичен.
     
     Гигиенические нормативы: ПДК в воде - 0,0004 мг/дм; МДУ в зерне хлебных злаков - 0,05 мг/кг.
     
     Область применения препарата
     
     Мефенпир-диэтил является антидотом и используется для ослабления фитотоксического действия некоторых гербицидов на культурные растения. Входит в состав гербицидных препаратов пума-супер 7.5, ЭМВ, пума-супер 100, КЭ и пума-супер комби, применяемых для уничтожения однолетних злаков в посевах зерновых колосовых культур, а также является составным компонентом гербицида секатор, использующегося для борьбы с однолетними и многолетними двудольными сорными растениями в посевах зерновых злаков и кукурузы.
     
     

2. Методика определения остаточных количеств мефенпир-диэтила в воде, почве, зерне и соломе зерновых колосовых  культур, зеленой массе и зерне кукурузы газохроматографическим методом

     
2.1. Основные положения

     
2.1.1. Принцип метода

     
     Метод основан на газохроматографическом определении мефенпир-диэтила с ДЭЗ на неподвижной фазе OV-225 после экстракции его из воды хлористым метиленом, из почвы, зеленой массы, зерна и соломы смесью ацетон-вода (2:1), очистки экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей, а также на колонке с силикагелем.
     
     Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.
     

2.1.2. Избирательность метода

     
     В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых в интенсивной технологии выращивания зерновых колосовых культур и кукурузы.
     

2.1.3. Метрологическая характеристика метода

     
     
Таблица

Метрологическая характеристика метода

2.4. Отбор проб

     
     Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79).
     
     Отобранные пробы зерна и соломы подсушивают до стандартной влажности и хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре не выше 4 °С не более трех месяцев. Зеленую массу хранят при температуре 0-4 °С в течение суток; для длительного хранения пробы замораживаются и хранятся при температуре минус 18 °С. Пробы воды хранят при температуре не выше 4 °С в течение 2 дней, при температуре минус 18 °С в течение месяца.
     
     Пробы почвы высушивают при комнатной температуре до воздушно-сухого состояния и хранят в стеклянной емкости не более трех месяцев.
     
     Перед анализом зерно и солому размалывают на мельнице, зеленую массу измельчают ножницами, сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм.
     

2.5. Подготовка к определению

     
2.5.1. Подготовка и очистка реактивов и растворителей

     
     Органические растворители перед началом работы очищают, сушат и перегоняют в соответствии с типовыми методиками. Гексан и хлористый метилен встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока свежая порция кислоты не перестанет окрашиваться. Затем растворители последовательно промывают водой, 2%-ным раствором гидроксида натрия и снова водой, после чего сушат над гидроксидом натрия и перегоняют.
     
     Ацетон перегоняют над перманганатом калия и поташом (на 1 л ацетона 10 г КМnO и 2 г КСО).
     
     Этилацетат промывают равным объемом 5%-ного раствора углекислого натрия, сушат над хлористым кальцием и перегоняют.
     

2.5.2. Подготовка и кондиционирование колонки

     
     Готовую насадку (3% OV-225 на Хромосорбе W(HP) засыпают в стеклянную колонку, уплотняют под вакуумом, колонку устанавливают в термостат хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют в токе азота при температуре 250 °С в течение 8-10 ч.
     

2.5.3. Приготовление стандартных растворов

     
     Основной стандартный раствор мефенпир-диэтила с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,010 г препарата, содержащего 99,4% д.в., в толуоле в мерной колбе на 100 мл. Раствор хранят в холодильнике не более месяца.
     
     Рабочие стандартные растворы с концентрациями 0,02; 0,04; 0,1 и 0,2 мкг/мл готовят из основного стандартного раствора мефенпир-диэтила соответствующим последовательным разбавлением толуолом. Рабочие растворы хранят в холодильнике не более 15 дней.
     

2.5.4. Построение калибровочного графика

     
     Для построения калибровочного графика в инжектор хроматографа вводят по 2 мкл рабочего стандартного раствора мефенпир-диэтила с концентрацией 0,02; 0,04; 0,1 и 0,2 мкг/мл. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений и находят среднее значение высоты хроматографического пика для каждой концентрации. Строят калибровочный график зависимости высоты хроматографического пика в мм от концентрации антидота в растворе в мкг/мл.
     

2.5.5. Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта

     
     В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 1,2 см вставляют тампон из стекловаты, закрывают кран и приливают около 10 мл гексана. Затем в колонку вносят суспензию 5 г силикагеля в 20 мл гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него 2 г безводного сульфата натрия. Колонку промывают 20 мл гексана со скоростью 1-2 капли в секунду, после чего она готова к работе.
     

2.5.6. Проверка хроматографического поведения мефенпир-диэтила на колонке с силикагелем

     
     В круглодонную колбу емкостью 10 мл отбирают 0,1 мл стандартного раствора мефенпир-диэтила с концентрацией 100 мкг/мл, отдувают растворитель потоком теплого воздуха, остаток растворяют в 3 мл элюента N 1 и наносят на подготовленную колонку. Промывают колонку 50 мл элюента N 1 и затем 50 мл элюента N 2 со скоростью 1-2 капли в секунду. Отбирают фракции по 5 мл каждая, упаривают досуха, остаток растворяют в 5 мл толуола и анализируют на содержание мефенпир-диэтила по п.2.7. Фракции, содержащие мефенпир-диэтил, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 50 мл толуола и вновь анализируют по п.2.7. Рассчитывают содержание вещества в элюате, определяют полноту вымывания из колонки и необходимый для очистки объем элюента.
     
     Примечание. Профиль вымывания мефенпир-диэтила может меняться при использовании новой партии сорбента и растворителей.
     
     

2.6. Описание определения

     
2.6.1. Экстракция мефенпир-диэтила

     
     2.6.1.1. Вода. 100 мл предварительно отфильтрованной воды помещают в делительную воронку емкостью 250 мл. Добавляют 30 мл хлористого метилена и встряхивают 1 мин. Нижний органический слой отделяют, собирая в коническую колбу на 100 мл. Водный слой повторно экстрагируют 30 мл хлористого метилена. Объединенную органическую фазу пропускают через слой безводного сульфата натрия и упаривают на роторном вакуумном испарителе досуха при температуре 30 °С. К остатку приливают 15 мл гексана и упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 °С. Процедуру повторяют, используя 10 мл гексана, и остаток растворяют в 2 мл толуола и анализируют на содержание мефенпир-диэтила по п.2.7.
     
     2.6.1.2. Почва. Навеску (20 г) воздушно-сухой почвы помещают в коническую колбу емкостью 250 мл, приливают 40 мл дистиллированной воды и спустя 5 мин 80 мл ацетона. Суспензию перемешивают в течение 30 мин на аппарате для встряхивания и фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Почву повторно экстрагируют 60 мл смеси ацетон-вода (2:1) при встряхивании в течение 30 мин и суспензию фильтруют. Объединенный фильтрат упаривают до водной фазы (около 40 мл) на роторном испарителе при температуре 40 °С. Дальнейшую очистку экстракта проводят по п.п.2.6.2 и 2.6.3.
     
     2.6.1.3. Зеленая масса, зерно, солома. Навеску (25 г) измельченной зеленой массы кукурузы заливают 100 мл смеси ацетон-вода (2:1, по объему) и перемешивают в течение 1 ч на аппарате для встряхивания. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Растительный материал повторно экстрагируют 100 мл смеси ацетон-вода (2:1) при встряхивании в течение 30 минут и суспензию фильтруют. Из объединенного экстракта отбирают аликвоту раствора (около 38 мл), эквивалентную 5 г растительной ткани, которую упаривают до водной фазы (около 10 мл) на роторном испарителе при температуре 40 °С. Дальнейшую очистку проводят по п.п.2.6.2 и 2.6.3.
     
     Навеску размолотого зерна (10 г) или соломы (5 г) помещают в коническую колбу емкостью 250 мл, приливают соответственно 30 или 20 мл дистиллированной воды и спустя 5 мин 60 или 40 мл ацетона. Суспензию перемешивают в течение 30 мин на аппарате для встряхивания и фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Растительный материал повторно экстрагируют смесью ацетон-вода (2:1) /45 мл для муки и 30 мл для соломы/ при встряхивании в течение 20 мин и суспензию фильтруют. Объединенные фильтраты муки или соломы упаривают до водной фазы (соответственно до объема около 30 и 20 мл) на роторном испарителе при температуре 40 °С. Дальнейшую очистку экстрактов проводят по п.п.2.6.2 и 2.6.3.
     

2.6.2. Очистка экстрактов

     
     Водные фазы почвенного и растительного экстрактов из п.п.2.6.1.2 и 2.6.1.3 переносят в делительную воронку емкостью 100 или 200 мл, добавляют хлорид натрия (12 г для почвы, 9 г для зерна и 5 г для зеленой массы и соломы) и 30 мл хлористого метилена. Смесь встряхивают в течение 1 мин и после ее расслоения отделяют дихлорметановый слой, который пропускают через стеклянный фильтр, заполненный безводным сульфатом натрия, в грушевидную колбу вместимостью 100 мл. Водную фракцию повторно экстрагируют 30 мл хлористого метилена. Объединенный дихлорметановый экстракт упаривают на роторном вакуумном испарителе досуха при температуре 30 °С.
     

2.6.3. Очистка на колонке с силикагелем

     
     Остаток в колбе, полученный при упаривании очищенных по п.2.6.2 экстрактов растительного материала и почвы, количественно переносят тремя 1 мл порциями гексана в подготовленную хроматографическую колонку (п.2.5.5) и дают растворителю стечь до верхнего края сорбента. Колонку промывают 50 мл элюента N 1 (гексан-этилацетат, 95:5), которые отбрасывают. Мефенпир-диэтил элюируют 50 мл элюента N 2 (гексан-этилацетат, 8:2), собирая элюат в грушевидную колбу емкостью 100 мл. Раствор упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 °С. Сухой остаток экстракта почвы, зерна и соломы колосовых культур растворяют в 2 мл толуола, а сухой остаток экстракта зеленой массы и зерна кукурузы в 5 мл толуола и анализируют по п.2.7.
     

2.7. Условия хроматографирования

     
     Газовый хроматограф Тракор (США), мод.570 с детектором по захвату электронов (Ni).
     

     Альтернативная фаза: 3% OV-17 на Инертоне-супер (0,16-0,20 мм); колонка стеклянная 1000х2 мм; условия хроматографирования те же.
     
     Время удерживания мефенпир-диэтила 4,7 мин.
     
     Каждую анализируемую пробу вводят 3 раза и вычисляют среднюю высоту пика.
     
     Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,20 мкг/мл, разбавляют толуолом.
     

2.8. Обработка результатов анализа

     
     Содержание мефенпир-диэтила рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:
     

,

где  - содержание мефенпир-диэтила в пробе, мг/дм или мг/кг;
     
      - высота пика стандарта, мм;
     
      - высота пика образца, мм;
     
      - концентрация стандартного раствора, мкг/мл;
     
      - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл;
     
      - масса анализируемого образца или его части, г (для зеленой массы кукурузы 5 г).
     
     

3. Требования техники безопасности

     
     Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами.
     
     

4. Контроль погрешности измерений

     
     Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95 ГСИ "Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа".
     
     

5. Разработчики

     
     Дубовая Л.В.; Талалакина Т.Н.; Макеев А.М., к.биол.н.
     
     ВНИИ фитопатологии, 143050, Московская обл., п/о Большие Вяземы, тел. 592-92-20.
     
     
     

Текст документа сверен по:
официальное издание
Сборник методических указаний. Вып.3.
Часть 3. МУК 4.1.1395-4.1.1398-03. -          
М.: Федеральный центр госсанэпиднадзора
Минздрава России, 2004