МУК 4.1.1390-03  

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств имидаклоприда в воде, почве, огурцах,
томатах, сахарной свекле, картофеле, перце и баклажанах
методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания

     
     
Дата введения 2003-06-30

     
     Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г.Онищенко 24 июня 2003 г.
     
     

1. Вводная часть

     
     Фирма-производитель: БайерКропСайенс (Германия).
     
     Торговое название: КОНФИДОР, ГАУЧО, АДМИР.
     
     Действующее вещество: имидаклоприд (NTN 33893).
     
     1-(6-хлор-3-пиридилметил)-N-нитроимидазолидин-2-илиденамин (ИЮПАК).
     
     1 -I(6-хлор-3-пиридинил)метилI-N-нитро-2-имидазолидинимин (С.А.).
     
     Структурная формула:     
     

     
     Эмпирическая формула:                                                                     М. м.: 255,7
     
     Бесцветное кристаллическое вещество со слабым характерным запахом.
     
     Температура плавления: 144 °С.
     
     Давление паров при 20 °С: 4х10 мПа.
     
     Коэффициент распределения н-октанол/вода: =0,57.
     
     Растворимость (г/л) при 20 °С: вода - 0,61; гексан - менее 0,1; дихлорметан - 55; изопропанол - 1,2; толуол - 0,68.
     
      Вещество устойчиво к гидролизу при рН 5-11 (Т более 1 года).
     
     Имидаклоприд относительно слабо передвигается по почвенному профилю и очень быстро разрушается в почве под действием света и микрофлоры. В растениях соединение постепенно метаболизируется.
     
     Краткая токсикологическая характеристика
     
     Острая пероральная токсичность (LD) для крыс - 450 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD) для крыс - более 5000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LC) для крыс - 69 мг/м воздуха.
     
     Имидаклоприд не вызывает раздражения слизистой оболочки кожи у кроликов. LC для рыб 211 мг/л (96 ч).
     
     Имидаклоприд практически нетоксичен для птиц, дождевых червей, водорослей, но опасен для пчел при прямом контакте.
     
     Гигиенические нормативы: ОДК в почве - 0,1 мг/кг; ПДК в воде водоемов - 0,03 мг/дм; МДУ в картофеле - 0,05, огурцах и томатах - 0,1 мг/кг.
     
     Область применения препарата
     
     Имидаклоприд - инсектицид нервно-паралитического действия, эффективно уничтожает листовую тлю, белокрылку, минеров, трипсов, колорадского жука, долгоносиков на хлопчатнике, рисе, картофеле, кукурузе, сахарной свекле, овощных культурах, цитрусовых, косточковых и семечковых плодовых в течение вегетационного периода. Вещество обладает системной активностью и может использоваться для обработки почвы и надземных органов растений.
     
     Проходит регистрационные испытания в России и странах СНГ в виде препарата Гаучо 600 FS (600 г имидаклоприда в 1 л препарата), предназначенного для протравливания семян и посадочного материала ряда культур, и препарата Конфидор, ВРК (200 г имидаклоприда в 1 л препарата), рекомендованного для обработки вегетирующих растений.
     
     

2. Методика определения остаточных количеств имидаклоприда в воде, почве,
огурцах, томатах, сахарной свекле, картофеле, перце и баклажанах
методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

     
2.1. Основные положения

     
2.1.1. Принцип метода

     
     Метод основан на определении имидаклоприда методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором после извлечения препарата из воды дихлорметаном, из почвы и растительного материала водным ацетоном, очистки экстрактов перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и на колонке с силикагелем.
     
     Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.
     

2.1.2. Избирательность метода

     В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых при возделывании сахарной свеклы, картофеля, а также огурцов, томатов, перца и баклажанов открытого и защищенного грунта.

2.1.3. Метрологическая характеристика метода

     
     
Таблица

     
Метрологическая характеристика метода

     

2.2. Реактивы, растворы, материалы

     
2.4. Отбор проб

     
     Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79).
     
     Отобранные пробы почвы, сахарной свеклы, огурцов, картофеля, томатов, перца и баклажанов хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике не более одного дня. Для длительного хранения пробы почвы доводят до воздушно-сухого состояния и хранят в холодильнике; пробы растительного материала хранят до анализа в морозильной камере при температуре -18 °С. Пробы воды хранят при температуре не выше 4 °С в течение 3 дней, при температуре -18 °С - в течение месяца.
     
     Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм, а растительный материал измельчают.
     

2.5. Подготовка к определению

2.5.1. Подготовка и очистка реактивов и растворителей

     Органические растворители перед началом работы очищают, сушат и перегоняют в соответствии с типовыми методиками. Гексан встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока свежая порция кислоты не перестанет окрашиваться. Затем гексан последовательно промывают водой, 2%-ным раствором гидроксида натрия и снова водой, после чего его сушат над гидроксидом натрия и перегоняют.
     
     Ацетон перегоняют над перманганатом калия и поташом (на 1 л ацетона 10 г  и 2 г ).
     
     Ацетонитрил сушат над пентаксидом фосфора и перегоняют; отогнанный растворитель повторно перегоняют над углекислым калием.
     
     Этилацетат промывают равным объемом 5%-ного раствора двууглекислого натрия, сушат над хлористым кальцием и перегоняют.
     

2.5.2. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ

     
     Отмеряют 250 мл ацетонитрила, переносят в колбу на 1000 мл, добавляют 750 мл бидистиллированной воды, перемешивают, фильтруют, дегазируют.
     

2.5.3. Кондиционирование колонки

     
     Промывают колонку для ВЭЖХ смесью ацетонитрил-вода (25:75, по объему) в течение 30 мин при скорости подачи растворителя 0,6 мл/мин. Включают детектор и ждут стабилизации базовой линии (5-15 мин).
     

2.5.4. Приготовление стандартных растворов

     
     Основной стандартный раствор имидаклоприда с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,010 г препарата, содержащего 99,6% д.в., в ацетонитриле в мерной колбе на 100 мл. Раствор хранят в холодильнике при температуре -12 °С не более месяца.
     
     Рабочие стандартные растворы с концентрациями 0,04, 0,08, 0,20 и 0,40 мкг/мл готовят из основного стандартного раствора имидаклоприда соответствующим последовательным разбавлением подвижной фазой для ВЭЖХ (п.2.5.2). Рабочие растворы хранят в холодильнике не более одного дня.
     
     При изучении полноты открывания имидаклоприда в модельных матрицах используются ацетонитрильные растворы вещества.
     

2.5.5. Построение калибровочного графика

     
     Для построения калибровочного графика в инжектор хроматографа вводят по 50 мкл рабочего стандартного раствора имидаклоприда с концентрацией 0,04; 0,08; 0,20 и 0,40 мкг/мл. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений и находят среднее значение высоты хроматографического пика для каждой концентрации. Строят калибровочный график зависимости высоты хроматографического пика в мм от концентрации имидаклоприда в растворе в мкг/мл.
     

2.5.6. Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта

     
     В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 1,8 см вставляют тампон из стекловаты, закрывают кран и вносят суспензию 5 г силикагеля в 20 мл смеси гексан-этилацетат (4:6, по объему). Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку последовательно промывают 50 мл смеси гексан-этилацетат (2:8, по объему) и 30 мл смеси гексан-этилацетат (4:6, по объему) со скоростью 1-2 капли в секунду, после чего она готова к работе.
     

2.5.7. Проверка хроматографического поведения имидаклоприда на колонке с силикагелем

     
     В круглодонную колбу емкостью 10 мл отбирают 0,1 мл стандартного раствора имидаклоприда с концентрацией 10 мкг/мл. Отдувают растворитель током теплого воздуха, остаток растворяют в 3 мл элюента N 1 и наносят на колонку. Промывают колонку 50 мл элюента N 1 (гексан-этилацетат, 4:6), затем 60 мл элюента N 2 (гексан-этилацетат, 2:8) со скоростью 1-2 капли в секунду. Отбирают фракции по 10 мл каждая, упаривают, остаток растворяют в 2 мл подвижной фазы для ВЭЖХ (п.2.5.2) и анализируют на содержание имидаклоприда по п.2.7.
     
     Фракции, содержащие имидаклоприд, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 4 мл подвижной фазы для ВЭЖХ и вновь анализируют по п.2.7. Рассчитывают содержание имидаклоприда в элюате, определяют полноту вымывания вещества из колонки и необходимый для очистки экстракта объем элюента.
     
     Примечание. Профиль вымывания имидаклоприда может меняться при использовании новой партии сорбента и растворителей.
     
     

2.6. Описание определения

     
2.6.1. Экстракция имидаклоприда

     
     2.6.1.1. Вода. 100 мл предварительно отфильтрованной воды помещают в делительную воронку емкостью 250 мл и обрабатывают 10 мл гексана при встряхивании в течение 1 мин. Гексановый слой отбрасывают и водную фазу экстрагируют дихлорметаном трижды (30+30+20 мл). Объединенную органическую фазу промывают в делительной воронке 20 мл 0,05 М раствора , а затем пропускают через слой безводного сульфата натрия и упаривают на роторном вакуумном испарителе досуха при температуре 30 °С. Сухой остаток растворяют в 1 мл подвижной фазы для ВЭЖХ (п.2.5.2) и анализируют по п.2.7.
     
     2.6.1.2. Почва. Навеску (20 г) воздушно-сухой почвы помещают в коническую колбу емкостью 250 мл, приливают 100 мл смеси ацетон-вода (3:1, по объему) и суспензию перемешивают в течение 1 ч на аппарате для встряхивания. Добавляют 2 г целита и фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Осадок переносят в колбу, приливают 50 мл указанной выше смеси, перемешивают 30 мин на аппарате для встряхивания и суспензию фильтруют через бумажный фильтр. Из объединенного экстракта отбирают аликвоту раствора (около 35 мл), эквивалентную 5 г почвы. Дальнейшую очистку проводят по пп.2.6.2 и 2.6.3.
     
     2.6.1.3. Сахарная свекла, картофель, огурцы, томаты, перец, баклажаны. К навеске (25 г) измельченного материала добавляют 125 мл смеси ацетон-вода (3:1, по объему) и гомогенизируют 3 мин при 10000 об./мин. К суспензии добавляют 2 г целита и фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу на 250 мл. Осадок на фильтре промывают 50 мл указанного выше водного ацетона. Из объединенного экстракта отбирают аликвоту раствора (около 35 мл), эквивалентную 5 г растительной ткани. Дальнейшую очистку проводят по пп.2.6.2 и 2.6.3.
     

2.6.2. Очистка экстракта

     
     Отобранные аликвоты растительного (из п.2.6.1.3) и почвенного (из п.2.6.1.2) экстрактов упаривают до объема 5-7 мл на роторном испарителе при температуре 30 °С. Водный остаток переносят в делительную воронку вместимостью 100 мл, приливают 40 мл бидистиллированной воды, 10 мл гексана и смесь встряхивают в течение 1 мин. Органический слой отбрасывают. Обработку водной фазы гексаном повторяют еще раз. Затем водную фазу трижды обрабатывают дихлорметаном (30+30+20 мл) при встряхивании. Объединенный дихлорметановый экстракт промывают в делительной воронке 20 мл 0,05 М раствора , а затем пропускают через слой безводного сульфата натрия и упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 °С.
     

2.6.3. Очистка на колонке с силикагелем

     
     Остаток в колбе, полученный при упаривании очищенных по п.2.6.2 экстрактов почвы или растительного материала, количественно переносят тремя порциями (1 мл) смеси гексан-этилацетат (4:6, по объему) в подготовленную хроматографическую колонку (п.2.5.6). Колонку промывают 30 мл смеси гексан-этилацетат (4:6, по объему), которые отбрасывают. Имидаклоприд элюируют 50 мл смеси гексан-этилацетат (2:8, по объему) и собирают элюат в грушевидную колбу емкостью 100 мл. Раствор упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 °С. Сухой остаток растворяют в 2,5 мл подвижной фазы для ВЭЖХ (п.2.5.2) и анализируют на содержание имидаклоприда по п.2.7.
     
     Примечание. При использовании новой партии сорбента или растворителей проводится проверка хроматографического поведения имидаклоприда на колонке с силикагелем.
     
     

2.7. Условия хроматографирования

     Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором Altex (США).
     
     Колонка стальная длиной 15 см, внутренним диаметром 4 мм, содержащая Диасорб 130-C10CN, зернением 5 мкм.
     
     Температура колонки: комнатная.
     
     Подвижная фаза: ацетонитрил-вода (25:75, по объему).
     
     Скорость потока элюента: 0,6 мл/мин.
     
     Рабочая длина волны: 268 нм.
     
     Чувствительность: 0,02 ед. абсорбции на шкалу.
     
     Объем вводимой пробы: 50 мкл.
     
     Время выхода имидаклоприда: 6 мин 45 с.
     
     Линейный диапазон детектирования: 2-20 нг.
     
     Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,4 мкг/мл, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.
     
     Альтернативная неподвижная фаза: Диасорб 130-С16 Т (5 мкм).
     
     Подвижная фаза: метанол-вода (50:50, по объему).
     
     Скорость потока элюента: 0,7 мл/мин.
     
     Время выхода имидаклоприда: 5 мин 20 с.
     

2.8. Обработка результатов анализа

     
     Содержание имидаклоприда рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:
     

,

     
где - содержание имидаклоприда в пробе, мг/кг или мг/дм;
     
      - высота пика образца, мм;
     
      - высота пика стандарта, мм;
     
      - концентрация стандартного раствора имидаклоприда, мкг/мл;
     
     - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл;
     
      - масса или объем анализируемой части образца, г или мл (для воды - 100 мл; для почвы и растительного материала - 5 г).
     
     

3. Требования техники безопасности

     
     Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами.
     

 4. Контроль погрешности измерений

     Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95. ГСИ "Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа".
          
     

5. Разработчики

     
     Макеев А.М., к. биол. н.; Дубовая Л.В.
     
     ВНИИ фитопатологии, 143050, Московская обл., п/о Большие Вяземы, тел. 592-92-20.
     
     
     
Текст документа сверен по:
официальное издание
Определение остаточных количеств пестицидов в
пищевых продуктах, сельскохозяйственном сырье и
объектах окружающей среды: Сб. методических указаний. -
М.: Федеральный центр госсанэпиднадзора Минздрава России, 2004