МУК 4.1.1223-03

     
     
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

     
     
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

     
Определение остаточных количеств метрибузина в клубнях картофеля
методом газожидкостной хроматографии

     
     
Дата введения 2003-07-01

     
     
     УТВЕРЖДЕНЫ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г.Онищенко 16 марта 2003 г.
     
     

1. Вводная часть

     
     Фирма производитель: Байер, АГ.
     
     Торговое название: ЗЕНКОР, СП.
     
     Действующее вещество: метрибузин.
     
     4-амино-6-трет-бутил-3-метилтио-1,2,4-триазин-5(4Н)-он (ИЮПАК).
     
     Структурная формула:  
     

                    
     Эмпирическая формула: CHNOS.
     
     Молекулярная масса: 214,3.
     
     Химически чистое вещество: бесцветные кристаллы.
     
     Температура плавления: 126,2 °С.
     
     Давление паров при 20 °С<10 мбар.
     
     Растворимость (г/1000 мл) при 20 °С в воде - 1,2, в гексане - 2,0, этаноле - 10, метаноле - 450, ацетонитриле - > 600, этилацетате - > 600, ацетоне - 820, хлороформе - 850.
     
     Стабильность: устойчив к действию разбавленных кислот и щелочей до рН 12,5 при 20 °С.
     
     Гигиенические нормативы: МДУ в картофеле - 0,25 мг/кг.
     
     Область применения препарата: Зенкор, СП - гербицид для борьбы с однолетними двудольными и злаковыми сорными растениями.
     
     

2. Метод определения метрибузина в клубнях картофеля
с применением газожидкостной хроматографии

     
2.1. Основные положения

     
2.1.1. Принцип метода

     
     Метод основан на извлечении остаточных количеств метрибузина из анализируемого объекта ацетоном, последующем перераспределении препарата из водно-ацетоновой фракции в дихлорметан, проведении очистки экстракта на колонке с силикагелем и концентрирования конечного реэкстракта.
     
     Количественное определение проводят с применением газожидкостной хроматографии с использованием термоионного детектора (ТИД), пламенно-фотометрического детектора (ПФД) или детектора электронного захвата (ДЭЗ), набивной или капиллярной колонки с неподвижной фазой типа SE-30.
     

2.1.2. Избирательность метода

     
     Проведение очистки экстрактов, а также использование селективных детекторов позволяет устранять влияние возможных мешающих анализу сопутствующих компонентов.
     

2.1.3. Метрологическая характеристика метода

     
     Диапазоны измеряемых концентраций, пределы обнаружения и другие метрологические параметры метода представлены в табл.
     
     

Таблица

Метрологические параметры метода

     
     
2.2. Реактивы, растворы, материалы

     
2.3. Приборы, аппаратура, посуда

     
2.4. Отбор проб

     
     Отбор проб для анализа проводят в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными 21.08.79, N 2051-79.
     
     Отобранные пробы хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике не более одного дня. Для длительного хранения пробы помещают в морозильную камеру с температурой -18 °С.
     
     Перед анализом клубни картофеля промывают водой для удаления остатков почвы. Из каждого неочищенного клубня берут сегменты по осевой линии. Сегменты нарезают ножом и после гомогенизации выделяют средний образец.
     
     

2.5. Подготовка к определению

     
2.5.1. Подготовка и очистка реактивов и растворителей

     
     Перед началом работы рекомендуется проверить чистоту применяемых органических растворителей. Для этого 100 мл растворителя упаривают в ротационном испарителе при температуре 40 °С до объема 1,0 мл и хроматографируют. При обнаружении мешающих определению примесей проводят очистку растворителей в соответствии с общепринятыми методиками.
     

2.5.2. Подготовка и кондиционирование набивной колонки

     
     Подготовленной насадкой (5% SE-30 на хроматоне N-Super или другом носителе) заполняют стеклянную колонку и уплотняют ее под вакуумом. Колонку устанавливают в термостате хроматографа, не подсоединяя к детектору, и кондиционируют ее при рабочем расходе газа-носителя и температуре 260 °С в течение 8-10 ч.
     

2.5.3. Приготовление стандартных растворов

     
     Основной раствор метрибузина с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,010 г препарата, содержащего 99,3% д.в., в ацетоне в мерной колбе на 100 мл. Раствор хранят в холодильнике не более месяца.
     
     Рабочие стандартные растворы с концентрациями 1,0, 2,0, 5,0 и 10,0 мкг/мл (при использовании ТИД и ПФД) или 0,1, 0,2, 0,5 и 1,0 мкг/мл (при использовании ДЭЗ) готовят из основного стандартного раствора метрибузина соответствующим последовательным разбавлением ацетоном. Рабочие растворы хранят в холодильнике не более двух недель.
     
     При изучении полноты извлечения метрибузина в модельных опытах используют ацетоновые растворы вещества.
     

2.5.4. Построение калибровочного графика

     
     Для построения калибровочного графика в инжектор хроматографа вводят по 1-2 мкл рабочего стандартного раствора метрибузина с концентрацией 1,0, 2,0, 5,0 и 10,0 мкг/мл (при использовании ТИД и ПФД) или 0,1, 0,2, 0,5 и 1,0 мкг/мл (при использовании ДЭЗ). Осуществляют не менее 5 параллельных измерений и находят среднее значение высоты (площади) хроматографического пика для каждой концентрации. Строят калибровочный график зависимости высоты (площади) хроматографического пика в мм (мм) от концентрации метрибузина в растворе в мкг/мл.
     

2.5.5. Подготовка колонки с силикагелем

     
     Силикагель прогревают в термостате при 130 °С в течение 3 ч и охлаждают до комнатной температуры. Стеклянную колонку размером 30,0х1,0 см заполняют (при легком постукивании) 3,0 г силикагеля (высота слоя ~7,0 см). Над слоем силикагеля помещают слой безводного сульфата натрия высотой 1,5-2,0 см и перед использованием промывают содержимое колонки 5,0 мл смеси дихлорметан:диэтиловый эфир (8:2).
     
     

2.6. Подготовка пробы

     
     Образец массой 20,0±0,1 г помещают в плоскодонную колбу емкостью 200 мл, добавляют 50 мл ацетона, слегка встряхивают и подвергают обработке ультразвуком в УЗ-бане по 5 мин два раза. После этого содержимое колбы фильтруют через складчатый бумажный фильтр белая лента в делительную воронку емкостью 500 мл. К остатку образца, находящемуся в колбе, приливают 50 мл ацетона и процедуру экстрагирования и фильтрования повторяют.
     
     При использовании аппарата для встряхивания в колбу с образцом вносят 80 мл ацетона и встряхивают в течение 30 мин. Содержимое колбы фильтруют через складчатый бумажный фильтр белая лента в делительную воронку емкостью 500 мл. Внутренние стенки колбы с образцом ополаскивают 20 мл ацетона и экстрагент фильтруют.
     
     К объединенному фильтрату в делительную воронку добавляют 250 мл бидистиллированной воды, 25 мл насыщенного водного раствора натрия хлорида и 25 мл дихлорметана. Воронку встряхивают в течение 1 мин и после 5 минутного отстаивания нижний дихлорметановый слой фильтруют через слой безводного сульфата натрия (толщина слоя - 1,0-1,5 см), помещенный на бумажный фильтр синяя лента, в грушевидную колбу (концентратор) емкостью 100 мл. Экстрагирование с использованием 25 мл дихлорметана повторяют еще раз. Водно-ацетоновый слой отбрасывают.
     
     Объединенный дихлорметановый экстракт упаривают на ротационном испарителе досуха при температуре водяной бани 40 °С. Остаток в колбе (концентраторе) перерастворяют 3 мл дихлорметана и переносят его для очистки в подготовленную колонку с силикагелем. Метрибузин элюируют двумя объемами по 5,0 мл смеси дихлорметан:диэтиловый эфир (8:2), собирая элюат в коническую пробирку емкостью 15 мл. Элюат упаривают досуха в токе азота. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона (при использовании ТИД и ПФД) или в 5 мл ацетона (при использовании ДЭЗ) и анализируют его на содержание метрибузина по п.2.7.
     
     

2.7. Условия хроматографирования

2.7.1. При использовании набивной колонки

     
     Газовый хроматограф "Цвет-560" с ТИД, ПФД или ДЭЗ (ДПР).
     
     Колонка хроматографическая набивная размером 1 м х 3 мм (внутренний диаметр) с неподвижной фазой 5% SE-30 на хроматоне N-Super, 0,125-0,16 мм
     
     Показания электрометра - 8х10
     
     Скорость движения ленты самописца - 0,25 см/мин
     
     Температура испарителя - 250 °С
     
     Температура колонки - 200 °С
     
     Температура детектора - 350 °С (для ТИД, ДЭЗ), 250 °С (для ПФД)
     
     Скорость потока газа-носителя (азот) - 30 см/мин
     
     Скорость водорода и воздуха к ТИД - 15 и 300 см/мин соответственно, к ПФД - 60 и 250 см/мин соответственно
     
     Объем вводимой пробы - 1-2 мкл
     
     Время удерживания метрибузина - 4,0±0,1 мин
     
     Предел детектирования - 0,05 нг для ДЭЗ (ДПР), 0,5 нг для ТИД и 1,0 нг для ПФД.
     
     Линейный диапазон детектирования - 0,1-1,0 нг для ДЭЗ (ДПР), 0,5-10 нг для ТИД и 1,0-10 нг для ПФД-сера.
     

2.7.2. При использовании капиллярной колонки

          
     Газовый хроматограф с ТИД, ПФД или ДЭЗ.
     
     Колонка хроматографическая капиллярная размером 5 м х 0,53 мм (внутренний диаметр) с неподвижной фазой НР-1 (типа SE-30), 2,65 мкм.
     
     Температура испарителя - 250 °С.
     
     Температура колонки с программированием при использовании ТИД или ДЭЗ от 60 °С (1 мин) до 260 °С (15 мин) со скоростью 10 °С/мин; при использовании ПФД-сера от 160 °С (1 мин) до 260 °С (15 мин) со скоростью 10 °С/мин.
     
     Температура детектора - 300 °С (для ТИД,  ДЭЗ), 200 °С (для ПФД).
     
     Скорость потока газа-носителя (гелий) - 10 см/мин.
     
     Скорость водорода и воздуха к ТИД - 30 и 300 см/мин соответственно, к ПФД - 90 и 200 см/мин соответственно, дополнительного газа (гелий) к ТИД - 60 см/мин, дополнительного газа (азот) к ДЭЗ - 40 см/мин.
     
     Объем вводимой пробы - 1 мкл.
     
     Время удерживания метрибузина при использовании ТИД или ДЭЗ 14,4±0,1 мин, при использовании ПФД - 4,5±0,1 мин.
     
     Предел детектирования - 0,02 нг для ДЭЗ, 0,2 нг для ТИД и 0,5 нг для ПФД.
     
     Линейный диапазон детектирования - 0,05-1,0 нг для ДЭЗ, 0,2-10 нг для ТИД и 0,5-10 нг для ПФД.
     

2.7.3. Обработка результатов анализа

     
     Содержание метрибузина рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:
     

,

     
где  - содержание метрибузина в пробе, мг/кг;
     
      - высота (площадь) пика образца, мм (мм);
     
      - высота (площадь) пика стандарта, мм (мм);
     
      - концентрация стандартного раствора метрибузина, мкг/мл;
     
      - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл;
     
      - масса анализируемой части образца (г).
     
     

3. Требования техники безопасности

     
     Необходимо соблюдать общепринятые правила техники безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами, а также требования, изложенные в документации на приборы.
     
     

4. Контроль погрешности измерений

     
     Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95. ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа.
     
     

5. Разработчики

     
     В.И.Долженко, П.А.Тарарин, Т.А.Маханькова, Н.А.Ермолова (Всесоюзный научно-исследовательский институт защиты растений (Санкт-Петербург).
     
     
     
Текст документа сверен по:
официальное издание
Определение остаточных количеств пестицидов
в пищевых продуктах, сельскохозяйственном
сырье и объектах окружающей среды:
Сборник методических указаний. Вып.2. Ч.3. -
М.: Федеральный центр гигиены и
эпидемиологии Роспотребнадзора, 2005