МУК 4.1.1144-02

     
     
Методические указания


4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств Трифлусульфурон-метила в воде, почве,
ботве и корнеплодах сахарной свеклы методом высокоэффективной
жидкостной хроматографии

     
     
Дата введения 2003-01-01

     
     
     УТВЕРЖДЕНЫ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г.Онищенко
     
     

1. Вводная часть

     
     Фирма-производитель - Дюпон де Немур.
     
     Торговое название: Карибу.
     
     Название действующего вещества по ИСО: Трифлусульфурон-метил.
     
     Название действующего вещества по IUPAC: метиловый эфир 2-[4-диметиламино-6-(2,2,2-трифторэтокси)-1,3,5-триазин-2-илкарбомоил-сульфонил]-мета-толуиловой кислоты.
          

     
     Химически чистый трифлусульфурон-метил представляет собой бесцветное кристаллическое вещество.
     
     Давление паров: 1,0х10 мПа при 25 °С.
     
     Температура плавления: 160-163 °С.
     
     Коэффициент распределения н-октанол-вода: 0,96 (рН 7).
     
     Растворимость в воде зависит от кислотности среды и составляет при рН 3 - 1,0, рН 5-  2,7, рН 7 - 110, рН 9 - 11000 мг/л. рКа - 4,4.
     
     Растворимость в органических растворителях (г/л при 20 °С): ацетон - 120, ацетонитрил - 80, гексан - менее 0,0016, дихлорметан - 580, метанол - 7, толуол - 2, хлороформ - 160, этилацетат - 27.
     
     Трифлусульфурон-метил стабилен в виде сухой пленки на стекле и относительно устойчив в растворах в ацетоне, ацетонитриле, метилен-хлориде и этилацетате. В водных растворах быстро гидролизуется: ДТ 3,7 дн. (рН - 5); 32 дн. (рН - 7); 36 дн. (рН - 9).
     
     Трифлусульфурон-метил быстро разрушается в почве и растениях. В почве при аэробных условиях период полураспада (ДТ) менее 3 дней в результате гидролиза и микробиологического разрушения. Гербицид не представляет опасности для чувствительных культур в севообороте, остатки его в урожае не обнаруживаются.
     
     Краткая гигиеническая характеристика
     
     Трифлусульфурон-метил относится к малоопасным соединениям по острой (ЛД для крыс более 5000 мг/кг) и дермальной токсичности (ЛД для крыс более 2000 мг/кг) и умеренно опасным по ингаляционной (ЛК (4 часа) более 5100 мг/м) токсичности, не вызывает раздражения глаз и кожи.
     
     В РФ установлены следующие гигиенические нормативы:
     
     ДСД - 0,04 мг/кг массы человека;
     
     ОДК в почве - 0,06 мг/кг;
     
     ПДК в воде водоемов - 0,05 мг/дм;
     
     МДУ в сахарной свекле - 0,02 мг/кг.
     
     Область применения
     
     Трифлусульфурон-метил - новый повсходовый гербицид из группы производных сульфонилмочевины, эффективный в борьбе с двудольными сорняками на плантациях сахарной свеклы при норме расхода 10-20 г д.в./га.
     
     

2. Методика определения трифлусульфурон-метила в воде, почве, ботве
и корнеплодах сахарной свеклы методом высокоэффективной
жидкостной хроматографии

     
2.1. Основные положения

     
2.1.1. Принцип метода

     
     Метод основан на определении остаточных количеств трифлусульфурон-метила с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с использованием фотокондуктивного детектора и колонки с силикагелем после его экстракции органическим растворителем и очистки экстракта путем перераспределения анализируемого вещества в двух несмешивающихся растворителях, изменяя рН среды. Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.
     

2.1.2. Избирательность метода

     
     В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых при выращивании сахарной свеклы.
     

2.1.3. Метрологическая характеристика метода

     
     
Таблица 1

     
Метрологическая характеристика метода

     
     
Таблица 2

     
Полнота определения трифлусульфурон-метила в воде, почве, корнеплодах и зеленой массе
сахарной свеклы (5 повторностей для каждой концентрации)

     
     
2.2. Реактивы, растворы, материалы и оборудование

2.2.1 Реактивы, материалы и растворы

2.3. Подготовка к определению

     
2.3.1. Кондиционирование хроматографической колонки

     
     Перед началом работы хроматографа раствор для кондиционирования колонки и подвижную фазу дегазируют, пропуская через растворы гелий в течение двух часов. Операцию повторяют ежедневно в течение часа перед началом анализа, не выключая прибора. При добавлении новой порции растворителей дегазирование проводят в течение двух часов.
     
     Готовую колонку устанавливают в термостат хроматографа и стабилизируют при 35 °С, пропуская через нее в течение четырех часов раствор для кондиционирования колонки со скоростью 0,5 мл/мин и затем еще 4 часа подвижную фазу для ВЭЖХ с той же скоростью. Эту операцию проводят ежесуточно в ночное время перед началом ввода проб с использованием таймеров (реле времени). Нарушение данного режима приводит к резкой потери чувствительности.
     

2.3.2. Приготовление стандартных растворов

     
     Стандартный раствор N 1 с концентрацией трифлусульфурон-метила 1 мг/мл готовят следующим образом: взвешивают на аналитических весах 50 мг трифлусульфурон-метила с точностью ±0,0002 г, переносят навеску в мерную колбу объемом 50 мл ацетонитрилом и доводят объем раствора в колбе тем же растворителем. Методом последовательного разбавления в ацетонитриле готовят стандартный раствор N 2 с концентрацией 100 мкг/мл. Растворы N 1 и N 2 можно хранить в холодильнике не более 1 месяца.
     
     Ежедневно из раствора N 2 готовят стандартный раствор N 3 в ацетонитриле с концентрацией 1 мкг/мл. Для калибровки хроматографа также ежедневно готовят рабочие стандартные растворы трифлусульфурон-метила с концентрациями 0,05; 0,1; 0,2; 0,4 и 0,6 мкг/мл, внося пипеткой соответствующие количества раствора N 3 в мерные колбы, упаривая ацетонитрил досуха током азота и доводя объем раствора до метки подвижной фазой без уксусной кислоты.
     
     Хроматографируют по 20 мкл каждого рабочего раствора, измеряют высоту (площадь) пика и строят график зависимости высоты (площади) пика от концентрации.
     

2.4. Отбор проб

     
     Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79). Пробы ботвы и корнеплодов анализируют в день отбора. Для длительного хранения пробы замораживаются и хранятся при температуре -18 °С. Перед анализом образцы корнеплодов измельчают на терке. Образцы воды перед анализом отфильтровывают. Для длительного хранения пробы почвы подсушиваются при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм.
     

2.5. Описание определения

     
2.5.1. Вода

     
     Аналитическую пробу воды объемом 250 мл помещают в коническую колбу объемом 500 мл, подкисляют концентрированной ортофосфорной кислотой до рН 4,0, добавляют 100 мл метиленхлорида и встряхивают смесь 5 мин на аппарате для встряхивания. Метиленхлорид отделяют в делительной воронке, а водный слой экстрагируют еще дважды, используя каждый раз по 50 мл метиленхлорида. После чего водный слой отбрасывают.
     
     Объединенный органический экстракт переносят в делительную воронку, прибавляют 50 мл 0,1 М раствора бикарбоната натрия и встряхивают смесь 20 с. После разделения слоев водную фазу собирают в химический стакан емкостью 250 мл. Метиленхлоридную фракцию возвращают в делительную воронку и повторяют экстракцию 50 мл раствора бикарбоната натрия еще раз. Собирают водную фазу в тот же стакан, метиленхлорид отбрасывают.
     
     Осторожно (вспенивание!) подкисляют водный экстракт концентрированной ортофосфорной кислотой до рН 4,0 и переносят его в чистую делительную воронку объемом 250 мл. Реэкстрагируют трифлусульфурон-метил последовательно двумя порциями метиленхлорида 50 и 25 мл встряхивая воронку каждый раз по 20 с. Водный слой отбрасывают, а метилен хлоридные фракции собирают в концентратор, пропуская через слой безводного сульфата натрия. Объединенный экстракт упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35 °С. Сухой остаток растворяют в 2 мл подвижной фазы без уксусной кислоты и хроматографируют.
     

2.5.2. Почва

     
     Помещают в коническую колбу или пластиковую банку объемом 250 мл навеску 25 г сухой (или соответствующее количество влажной) почвы, добавляют 80 мл смеси ацетонитрила и 0,1 М раствора бикарбоната натрия в соотношении 3:1 по объему и встряхивают смесь 30 мин на аппарате для встряхивания. Смесь центрифугируют при 4000 об./мин в течение 10 мин. Супернатант переносят в концентратор, а почву еще раз экстрагируют 40 мл смеси ацетонитрила с 0,1 М раствором бикарбоната натрия в течение 30 мин. После центрифугирования супернатанты объединяют в концентраторе, добавляют 25 мл бидистиллированной воды и упаривают ацетонитрил на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не свыше 35 °С.
     
     Водный остаток подкисляют концентрированной ортофосфорной кислотой до рН 4,0, переносят в делительную воронку емкостью 250 мл и обмывают концентратор 10 мл метиленхлорида. Трифлусульфурон-метил экстрагируют дважды порциями по 20 мл метиленхлорида, встряхивая воронку по 20 с и собирая метиленхлорид в концентратор. Водную фазу отбрасывают, а объединенный метиленхлоридный экстракт упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не свыше 35 °С.
     
     Сухой остаток в концентраторе растворяют в 5 мл ацетонитрила и переносят в химический стакан объемом 150 мл, обмывая концентратор еще одной порцией метиленхлорида 5 мл. К ацетонитриловому раствору добавляют 30 мл бидистиллированной воды, подкисляют концентрированной ортофосфорной кислотой до рН 4,0, переносят в делительную воронку емкостью 250 мл и обмывают стакан 10 мл метиленхлорида.
     
     Реэкстрагируют трифлусульфурон-метил двумя порциями метиленхлорида по 20 и 15 мл, встряхивая воронку 20 с. Объединенную метиленхлоридную фракцию переносят в концентратор, пропуская ее через слой безводного сульфата натрия и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не свыше 35 °С.
     
     Сухой остаток растворяют в 4 мл подвижной фазы без уксусной кислоты и хроматографируют.
     

2.5.3. Корнеплоды сахарной свеклы

     
     Помещают в коническую колбу или пластиковую банку объемом 500 мл навеску 50 г измельченных корнеплодов сахарной свеклы, добавляют 250 мл смеси ацетонитрила и 0,1 М раствора бикарбоната натрия в соотношении 3:2 по объему и встряхивают смесь 30 мин на аппарате для встряхивания. Экстракт фильтруют в концентратор. Остаток на фильтре переносят обратно в колбу или пластиковую банку и повторяют экстракцию с тем же количеством экстрагента. Экстракты объединяют и упаривают ацетонитрил на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не свыше 35 °С.
     
     Водный остаток переносят в стакан объемом 250 мл, обмывая концентратор 10 мл бидистиллированной воды, добавляют к раствору 100 мл такой же воды и подкисляют концентрированной ортофосфорной кислотой до рН 4,0. После подкисления экстракт переносят в делительную воронку на 250 мл и реэкстрагируют трифлусульфурон-метил двумя порциями метиленхлорида по 50 мл, встряхивая каждый раз воронку в течение 20 с. Метиленхлорид собирают в концентратор, а водную фазу отбрасывают. Растворитель упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не свыше 35 °С.
     
     Сухой остаток в концентраторе растворяют в 5 мл ацетонитрила и прибавляют 50 мл бидистиллированной воды. Смесь переносят в стакан емкостью 150 мл и подкисляют концентрированной ортофосфорной кислотой до рН 4,0. Подкисленную фракцию помещают в делительную воронку емкостью 250 мл и реэкстрагируют трифлусульфурон-метил двумя порциями метиленхлорида по 25 мл, встряхивая каждый раз воронку в течение 20 с. Метиленхлоридные экстракты объединяют в концентраторе, пропуская их через слой безводного сульфата натрия и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не свыше 35 °С.
     
     Сухой остаток растворяют в 5 мл подвижной фазы без уксусной кислоты и хроматографируют.
     

2.5.4. Ботва сахарной свеклы

     
     Помещают в коническую колбу или пластиковую банку объемом 250 мл навеску 10 г измельченной ботвы сахарной свеклы, добавляют 50 мл этилацетата и встряхивают смесь 30 мин на аппарате для встряхивания. Экстракт фильтруют в концентратор. Остаток на фильтре переносят обратно в колбу или пластиковую банку и повторяют экстракцию с тем же количеством экстрагента. Экстракты объединяют и упаривают этилацетат на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не свыше 35 °С до объема примерно 10 мл.
     
     Остаток переносят в делительную воронку на 250 мл, споласкивая концентратор 10 мл 0,1 М раствора бикарбоната натрия. Добавляют в воронку 40 мл раствора бикарбоната натрия, встряхивают воронку в течение 1 мин. После разделения слоев водную фракцию сливают в химический стакан на 250 мл, повторяют экстракцию еще раз с 50 мл бикарбоната натрия. Водные экстракты объединяют в стакане и подкисляют концентрированной ортофосфорной кислотой до рН 4,0. Раствор переносят в чистую делительную воронку, обмывая стакан 10 мл метиленхлорида. В воронку приливают 40 мл метиленхлорида, встряхивают ее 30 с и после разделения слоев собирают метиленхлорид в концентратор. Экстракцию повторяют еще раз с 50 мл метиленхлорида. Объединенные экстракты упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не свыше 35 °С. Сухой остаток растворяют в 5 мл подвижной фазы без уксусной кислоты и хроматографируют.
     

2.6. Условия хроматографирования и обработка результатов

     
2.6.1. Условия хроматографирования

     
     Жидкостный хроматограф Waters 510 с термостатом колонок с программатором температуры и фотокондуктивным детектором Tracоr 965 или другой аналогичного типа.
     

     Колонка стальная, длиной 30 см, внутренним диаметром 4 мм, неподвижная фаза m Порасил (фирма Waters).
     

     Линейность детектирования сохраняется в пределах 2-20 нг
     
     Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 2 раза и вычисляют среднюю высоту (площадь) пика. Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 1,0 мкг/мл разбавляют.
     

2.6.2. Обработка результатов анализа

     
     Содержание трифлусульфурон-метила в пробе рассчитывают по формуле:
     

, где

     
      - содержание трифлусульфурон-метила в пробе, мг/кг или мг/мл;
     
      - высота (площадь) пика стандарта, мм;
     
      - высота (площадь) пика образца, мм;
     
      - концентрация стандартного раствора, мкг/мл;
     
      - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл;
     
      - масса анализируемого образца, г;
     
      - содержание трифлусульфурон-метила в аналитическом стандарте, %.
     
     

3. Требования техники безопасности

     
     Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами.
     
     

4. Разработчики

     
     Калинин В.А., профессор, к.с-х.н.; Калинина Т.С., к.с-х.н.; Довгилевич Е.В., к.биол.н.; Довгилевич А.В., к.хим.н.
     
     Московская сельскохозяйственная академия им. К.А.Тимирязева. 127550, Москва, Тимирязевский пр., 2, кафедра химических средств защиты растений. Телефон: 976-02-20.
     
     
     

Текст документа сверен по:
официальное издание
Определение остаточных количеств пестицидов
в пищевых продуктах, сельскохозяйственном сырье
и объектах окружающей среды: Сборник методических
указаний. Выпуск 1. - М.: Федеральный центр
госсанэпиднадзора Минздрава России, 2004